出版社内容情報
《内容》 現在免疫研究室において必要となる各種実験法を網羅し，準備・手順・方法・実験を成功させるためのポイントを第一線の研究者が自らの経験を踏まえて懇切に解説したハンドブック.今回の改訂では，免疫生物学から分子免疫学への潮流を視野において細胞生物学，分子生物学的手法の項を一層充実させた.免疫およびその関連領域の研究に携わる研究者必携の書である. 改訂2版の序 1992年に本書初版が発行された.当時すでに免疫学は免疫生物学から分子免疫学への潮流に乗っていたが，この4年間でその傾向はさらに強くなった.すなわち，細胞内シグナル情報伝達機構の研究である.もはや免疫細胞を用いた細胞生物学・分子生物学の研究といった観がある.そのような背景より，細胞生物学・分子生物学の項をさらに充実させることを第一義として本改訂が企画された.今後さらに免疫学研究の流れに即した研究法ハンドブックにするための努力を重ねたいと念願している. 《目次》 目次 I.細胞を取り扱うための手法 1 1.細胞浮遊液の調製…3 A.マウスリンパ系細胞…〈清水 淳，藤原大美〉3 1)lymph node， spleen， thymus…3 2)骨髄細胞…4 3)peritoneal exudative cells…6 B.ラット，マウスの肝細胞…〈立石紀子〉8 C.マウス表皮細胞とLANGERHANS細胞…〈玉置邦彦〉21 D.ヒト末梢血リンパ球…〈谷口泰代，淀井淳司〉24 a.各種材料からのリンパ球分離…24 1)末梢血および骨髄からのリンパ球の分離法…24 2)組織からのリンパ球分離法…25 b.リンパ球の調製…26 1)生存率の確認…26 2)死細胞の除去…27 2.細胞分離，分画法…28 A.positive selection of murine lymphoid cells…28 a.T細胞…〈清水 淳，藤原大美〉28 b.B細胞…〈清水 淳，藤原大美〉30 c.抗原提示細胞…〈稲葉カヨ〉32 d.in vitro培養により分化誘導される樹状細胞の調製…〈稲葉カヨ〉39 B.negative selection of murine lymphoid cells…42 a.T細胞の全画分またはサブセットのelimination…〈清水 淳，藤原大美〉42 b.B細胞のelimination…〈清水 淳，藤原大美〉43 c.macrophages…〈清水 淳，藤原大美〉44 d.磁気ビーズを用いたリンパ球サブセットの分離，除去法…〈小杉 厚，藤原大美〉46 C.ヒト末梢血のT，B，monocyteの画分…51 a.T細胞，B細胞，単球の分離…〈中村和史，淀井淳司〉51 1)T細胞の分離法…51 2)B細胞の分離法…53 3)単球の分離…53 b.カウンターフローエルトリエーション法によるヒト末梢血単球分離…〈仁井昌彦，曽根三郎，小倉 剛〉54 3.細胞株の樹立と株化細胞の維持…60 A.ハイブリドーマ…60 a.B細胞ハイブリドーマ…〈佐川公矯，原 昭典〉60 b.T細胞ハイブリドーマ…〈金川修身〉75 B.T cell clones…80 a.ヘルパーT細胞…〈浅野喜博〉80 b.キラーT細胞…〈篠原信賢〉84 C.stromal cell lines…89 a.骨 髄…〈西川里美，西川伸一〉89 b.胸 腺…〈緒方正人〉98 D.tumor cell lines…102 a.白血病細胞…〈前田道之〉102 b.固形腫瘍…〈清水恵司〉106 II.免疫生物学のアッセイシステム 111 1.proliferative responses…113 A.bulk lymphocyte responses by freshly isolated cells…〈榊田(北川)悟，佐藤総一郎，藤原大美〉113 B.lymphokine-dependent cell line…118 a.IL-1…〈向田直史，松島綱治〉118 1)線維芽細胞の増殖反応をみる方法…119 2)マウスD10.G4細胞の増殖反応をみる方法…120 3)ヒトリンパ球性白血病細胞株HSB.2のIL-1の依存的IL-2産生をみる方法…122 b.IL-2…〈戸村道夫，藤原大美〉125 c.IL-3…〈花海 清，熊谷勝男〉127 d.IL-4…〈善本知広，中西憲司〉128 1)精製静止期B細胞を用いたB cell co-stimulation assayによるIL-4活性の測定 …129 2)IL-4依存性マウスT細胞株(CT.4S)を用いたIL-4活性の測定…137 3)マウスB細胞株(BCL1-CL-3細胞)を用いたIL-4活性の測定…140 e.IL-5…〈菊池雄士〉143 1)DNA合成の促進を指標とした測定…144 2)ELISA法によるIL-5の定量…145 f.IL-6…〈緒方 篤，西本憲弘，田合ひろみ，吉崎和幸〉148 g.IL-7…〈高井康之，藤原大美〉154 h.IL-12(antibody-capture assay)…〈丸尾聖爾，藤原大美〉158 i.TGF-β…162 1)growth inhibitory assay…〈滝内秀和，多田 剛，藤原大美〉162 2)colony forming assay…〈片桐達雄，多田 剛，藤原大美〉166 2.cytotoxicity assays…172 A.CTL-mediated cytotoxicity…〈鵜殿平一郎，中山睿一〉172 1)in vitro感作によるCTLの誘導…172 2)クロミウム遊離試験…174 3)脾細胞Con A blastの調製法…176 B.CDC and ADCC…〈鵜殿平一郎，中山睿一〉177 a.CDC…177 b.ADCC…178 C.単球，マクロファージによる腫瘍細胞障害反応試験…〈曽根三郎〉180 1)125I-IUdR遊離試験…181 2)51Cr遊離試験法…184 3.nonproliferative assay for cytokine activity…187 A.IFN…〈米原 伸〉187 B.WEHI-279を用いたIFN-γ活性測定法…〈RISHANI WIJESURIYA，藤原大美〉190 C.TNF & LT…〈米原 伸〉193 D.IL-2レセプター誘導実験…〈山内清明，淀井淳司〉195 E.NOの測定法…〈慕 杰，藤原大美〉199 4.抗体および抗体産生細胞の検出…201 A.プラーク法…〈平野裕之，邵 東子，小野史郎〉201 種々の感作赤血球の作製法…205 B.ELISA法…〈平野裕之，邵 東子，小野史郎〉208 C.ELISPOT法…〈平野裕之，小野史郎〉216 5.遅延型過敏症反応(DTH)…〈中村玲子，木ノ本雅通〉220 6.即時型過敏症反応…〈相谷雅一，末村正樹〉226 1)受身皮膚アナフィラキシー(PCA)反応…226 2)PRAUSNITZ-KU¨STNER(P-K)反応…228 3)リバースP-K反応…229 7.細胞間相互作用の検出法…230 1)白血球-内皮細胞間相互作用の定量法…〈反町典子，宮坂昌之〉230 2)白血球と血小板間の相互作用の定量法…〈永田喜三郎，辻 勉，入村達郎〉233 8.ligand binding assay-SCATCHARD analysis…〈高倉賢二，多賀谷 温，淀井淳司〉238 9.FcレセプターとIBF…〈河邊拓己，淀井淳司，嶋田俊秀〉244 III.細胞，動物の細胞免疫学的および免疫生物学的処置法 247 1.various treatment of cells…249 A.chloroquine， paraformaldehyde…〈吉岡貴幸〉249 B.flow cytometry…〈山下達雄〉252 1)細胞の調製および抗体染色…252 2)フローサイトメーターを用いた解析…256 C.細胞質内抗原のフローサイトメトリー…〈安倍邦子，小路武彦，中根一穂〉261 D.RIによるcellular proteinの標識…〈松田光弘，高倉賢二，淀井淳司〉264 2.various treatment of animals…267 A.キメラ動物-作製とチェック…〈横山峯介，伊藤 守，奥平博一〉267 B.T cell-deprived B cell mouse作製…〈杉原茂孝〉275 C.胸腺移植…〈坂口志文〉279 D.胸腺の臓器培養…〈垣生園子〉281 E.皮膚移植…〈榊田(北川)悟，佐藤総一郎，藤原大美〉288 F.in vivo cell migration assay…〈小川 真，藤原大美〉293 IV.免疫化学 297 1.蛋白質の取り扱い…〈東 隆親〉299 1)蛋白濃度の測定…299 2)濃縮法…300 3)抗原の精製-微量蛋白質抗原の精製…301 4)抗原の精製-ペプチド抗原の調製…302 5)抗原の精製-ハプテン…303 6)抗体の精製…304 2.クロマトグラフィー…306 A.FPLCゲル濾過クロマトグラフィー…〈片桐洋子，上出利光〉306 B.イオン交換クロマトグラフィー…〈片桐洋子，上出利光〉309 C.クロマトフォーカシング…〈佐藤総一郎〉315 D.高速液体クロマトグラフィー(HPLC)…〈加藤光一〉323 a.逆相HPLC…323 b.イオン交換HPLC…327 E.抗体／抗原のアフィニティー精製法…〈三井 彰〉330 3.電気泳動…333 A.免疫電気泳動法…〈松崎博充〉333 B.SDS-PAGE…〈前田洋助，服部俊夫〉339 C.Western blotting…〈小安重夫〉345 D.二次元電気泳動…〈小安重夫〉350 4.酵素抗体法…〈吉岡秀幸，杉山武敏〉356 V.細胞生物学的手法 363 1.細胞内Ca測定法…〈小安重夫〉365 2.protein kinase C(Cキナーゼ)測定法…〈箸本英吉，山村博平〉369 3.gel shift assay…〈増谷 弘〉373 4.in vivo，in vitroでの細胞内基質のリン酸化…〈小安重夫〉379 5.immunoprecipitation(免疫沈降)…〈阿部佳子〉386 6.in vitro kinase assay…〈阿部佳子〉391 7.低分子量GTP結合蛋白質…〈朝倉 剛，佐々木卓也，高井義美〉393 a.低分子量G蛋白質の活性測定法…396 1)［35S］GTPγS結合活性…396 2)GTPアーゼ活性…398 b.低分子量G蛋白質の活性調節蛋白質…400 1)GTPアーゼ活性促進蛋白質(GAP)活性…400 2)GDP解離抑制蛋白質(GDI)活性…401 3)GDP／GTP交換反応促進蛋白質(GEP)活性…403 c.低分子量G蛋白質のポリイソプレノイド基転移酵素活性…405 d.低分子量G蛋白質の細胞膜への結合の測定法…406 8.細胞周期…〈小安重夫〉409 9.apoptosis検出法…〈 旭光，豊岡和人，藤原大美〉412 1)DNA断片化の生化学的解析法…412 2)FACScanによる細胞周期の解析法…414 3)TUNEL法によるアポトーシス解析法…416 VI.分子生物学的手法 421 1.DNA，RNAの調製法…〈岩田哲史，淀井淳司〉423 1)RNAの調製法…423 2)DNAの調製法…426 2.プローブの標識一般…〈岩田哲史，淀井淳司〉428 a.核酸ラベル…428 1)nick translation法…428 2)マルチプライム法…429 3)末端標識法-kination…430 4)末端標識法-Klenow酵素…431 5)リボプローブ法…431 b.プローブのspecific activityの測定と分離…433 1)TCA沈澱法によるspecの測定…433 2)ゲル濾過によるDNAプローブの精製…433 3.Southern， Northern blotting…435 A.Southern blotting…〈山本益嗣，吉田光範，二階堂敏雄〉435 B.Northern blotting…〈吉田光範，山本益嗣，二階堂敏雄〉442 4.ribonuclease protection assay…〈山本紀彦，于 文功，藤原大美〉455 5.reporter assay-CAT assay， luciferase assay…〈広田喜一〉463 6.antisense DNAおよびRNAの使用法…〈劉 照軍，南 康博〉469 7.融合蛋白質fusion proteinの調製法…〈薬 立波，川上裕子，川上敏明〉472 8.遺伝子クローニング一般…〈林田一洋〉478 1)蛋白の性質による検討…478 2)cDNAライブラリーの作製(vectorの選択)…480 3)cDNAライブラリーの作製(一般的注意事項)…482 4)cDNAライブラリー作製の具体例…483 9.PCR法…〈緒方正人〉485 1)cDNAの作製…486 2)PCR…488 3)PCR増幅DNAの解析…492 10.免疫組織化学的in situ hybridizationによる特異的mRNAの発現解析法 …〈小路武彦，中根一穂〉494 11.トランスジェニックマウス作製法…〈山村研一〉503 12.gene targeting…〈西城 薫，斉藤 隆〉512 1)ターゲティングベクターの作製…512 2)ターゲティングベクターのES細胞への導入と相同組替え体のクローニング…513 3)変異キメラマウスの作製…516 4)ホモミュータントマウスの作製…520 5)ジーンターゲティングの応用例…521
